Plateaux Techniques

A3M

Analyse Métabolisme Modélisation Moléculaire

(04 72 43 80 85)

Responsable : Isabelle Rahioui (TR INRA, 100%),
Responsables scientifiques : Pedro Da Silva

Objectifs: Cette plate-forme technique est dédiée à l’identification et à la quantification des acides aminés d’un extrait biologique. Les extraits peuvent être traités directement pour l’analyse de leur composition en acides aminés libres ou, après hydrolyse, pour la détermination de la composition en acides aminés des peptides et protéines. Le matériel est également adapté pour quantifier l’activité radioactive des acides aminés lors d’expérimentations avec des traceurs radioactifs (14C, 35S et 3H). Le but de ces analyses d’acides aminés est de répondre, par exemple, aux besoins de quantification lors des études métaboliques ou de bilans nutritionnels chez divers organismes. 

Technique et matériels : Les acides aminés sont séparés par chromatographie liquide haute performance en phase inverse après dérivation pré-colonne à l’orthophtalaldéhyde (OPA) ou au fluorénylméthyl chloroformiate (FMOC) puis détectés et quantifiés par fluorimétrie : excitation à 340 nm avec une détection à 450 nm pour les acides aminés primaires dérivés à l’OPA ; excitation à 266 nm avec une détection à 305 nm pour les acides aminés secondaires dérivés au FMOC. Les analyses sont réalisées sur un volume minimal d’environ 10 µL et, pour chacun des acides aminés identifiés, la limite de quantification est de l’ordre de 20 pmol/µL.

Le matériel disponible actuellement comprend une chaîne HPLC (Agilent 1100) équipée d’un passeur d’échantillons automatique et d’un détecteur à fluorescence. Une station d’hydrolyse HCl phase vapeur (Waters Pico-Tag) et un compteur à scintillation en flux (Lablogic ß-RAM 4) complètent cette chaîne d’analyse., Conditions d’accès:Cette plate-forme d’analyses est ouverte (en fonction de la charge de travail) aux équipes extérieures à l’unité selon différentes modalités :

  • Prestation interne IFR. Les analyses sont effectuées par l’ingénieur responsable de la plate-forme et les résultats sont remis à l’équipe demandeuse pour interprétation. La facturation ne comprend que le coût réel des analyses, le coût de la main d’oeuvre est pris en charge par l’UMR BF2I.
  • Collaboration avec l’UMR BF2I. Pour les projets conduits en collaboration, un ou plusieurs membres de l’unité BF2I peuvent participer à la mise en place du protocole et à l’interprétation des résultats. Le coût des analyses (fonctionnement et main d’oeuvre) sont pris en charge par l’unité BF2I, les membres de l’unité participant à ce projet sont co-auteurs des publications.
  • Prestation externe réalisée après signature d’un contrat. Après analyse, les résultats sont remis au demandeur qui en a la propriété. La facturation prend en compte le coût réel des analyses ainsi que le coût de la main d’oeuvre.
 

Localisation : Cette plate-forme 'Analyse Métabolisme Modélisation Moléculaire' est localisée au sein de l’UMR203 BF2I, dans le bâtiment Louis Pasteur à l’INSA de Lyon (Pasteur, Étage 1, Salle 406.01.08).